Protocoale de recoltare

Pentru rezultate cit mai corecte si fidele in ceea ce priveste recoltarea probelor biologice, va
aducem la cunostinta urmatoarele :

1. Pentru coagulare/ biochimie/hormoni/hemoleucograma (prin punctie venoasa) se recomanda :
• Pentru probele de coagulare se recolteaza in eprubete cu dop albastru care contin citrat de sodiu 3.2% (conform standardelor CLIA)sau 3.8%(concentratia, inca, agreata la nivel national); proportia dintre singe:anticoagulant este de 9:1.Nerespectarea proportiei de anticoagulant duce la modificari ale parametrilor, va induce cresterea valorilor APTT. Protrombina este stabila 24 ore in tub nedeschis , pastrat la temp camerei. In general probele nu se pastreaza , se lucreaza la max 8 ore de la recolta si la temperatura camerei. Este de mentionat ca probele(Atentie! – doar plasma) congelate la – 20 C pot fi stabile pentru unii factori, dar nu pentru majoritatea .
• Probele pentru biochimie se recolteaza pe eprubete cu dop rosu cu sau fara aditivi .De regula analizele de biochimie se lucreaza din ser (recoltarea de sange pe eprubete fara anticoagulant ) ,obtinut dupa centrifugarea sangelui. Probele recoltate se lucreaza in max 6 ore de la recoltare. Probele nu se pastreaza de pe o zi pe alta pentru ca, majoritatea analitilor isi modifica valoarea in plus ( K, ALT,AST,LDH,Ca,Fe) sau in minus (glicemia). Nu se lucreaza probele hemolizate, serul hiperlipemic, icteric este mentionat pe cererea de
analize si trecut pe raportul final de analiza.
• Probele pentru determinari hormonale se recolteaza pe eprubete cu aditivi sau gel separator. Probele recoltate sunt stabile la frigider 14 zile la 2-8 ºC( pe eprubetele cu gel separator) sau 6 luni la -20ºC, scoase de pe depozitul de hematii (nici o proba nu se congeleaza pe depozit de hematii) si se noteaza faza ciclului menstrual, graviditate – trimestrul de sarcina, menopauza.
• Probele pentru hemoleucograma se recolteaza in eprubete cu dop mov, contin EDTA-K2 sau EDTA-K3. Se prelucreaza pentru frotiu sanguin si reticulocite in maxim 1ora de la recoltare ; pentru numaratoare , Hb , Ht, trombocite, in max 6 ore de la recoltare, iar probele pentru hemoleucograma se pot conserva maxim 24 ore la temperatura camerei, cu efectuarea frotiului la maxim 5 ore de la recoltare. Recoltarea pentru hemoglobina glicozilata se face tot pe eprubeta cu capac mov.

2. Pentru recoltarea probelor de urina, materii fecale, secretii (faringiene, nazale,otice, conjunctivale, purulente, uretrale) , sputa, sperma se recomanda:
Conditiile optime de recoltare a secretiilor, urinei si materiilor fecale pentru examenul bacteriologic, micologic si microscopic sunt urmatoarele:
- recoltarea se face inaintea oricarui tratament cu antibiotic, antiseptic, antifungic
- controlul se face numai dupa 7 zile de la terminarea tratamentului antibiotic si la 14 zile dupa terminarea tratamentului antifungic
- recoltarea se face obligatoriu in recipiente sterile
- evitarea contactului secretiilor, urinei si materiilor fecale cu substante bactericide sau bacteriostatice
- folosirea mediilor de transport (doar pentru anumite analize)
- ambalarea in mod corespunzator a recipientelor, pentru evitarea contaminarii mediului si a personalului
• Pentru sumarul de urina
- se utilizeaza recipiente de unica utilizare de volume 30 ml -100 ml
- se face toaleta zonei genitale cu apa si sapun
- se recoltaza spontan primul jet de urina in recipientul dat de laborator
• Pentru determinari cantitative (glucoza, proteine urinare etc) se recolteaza urina din 24 ore astfel : in dimineata inceperii recoltei prima urina se arunca si apoi se colecteaza toate emisiile de urina , intr-un recipient curat,acoperit, pastrat la rece si la intuneric, timp de 24 ore inclusiv ultima urina de la aceesai ora la care a inceput recoltarea. Se masoara cantitatea totala de urina, si se iau aprox 100 ml din aceasta cantitate care se aduce la laborator insotita de numele pacinetului, cerinta de analiza , cantitatea totala de urina din  are s-a luat esantionul.
• Pentru urocultura
- se recolteaza in recipiente sterile , de unica utilizare
- se recolteaza din prima urina de dimineata
- pacientul /pacienta isi va face toaleta locala cu apa si sapun
- pentru femei se recomanda utilizarea unui tampon vaginal, pentru evitarea contaminarii cu flora vaginala
- se recolteaza un esantion de urina , din mijlocul jetului
- se inchide recipientul fara a atinge fata interna a dopului , se noteaza datele pacientului , daca se administreaza sau nu medicamente in momentul recoltarii , si se aduce proba la laborator in max .3 ore de la recoltare.
- transportul probelor de urina – se face in recipiente la temperatura camerei
- probele de urina nu se pot conserva.
• Pentru examenul coproparazitologic
- recoltarea se face in coprorecoltoare de plastic cu lingurita.
- proba se recolteaza din materii fecale emise spontan, fara utilizrea de purgative, prelevand fragmente din diferite parti. De asemenea, se poate recolta orice fragment suspect , mucozitati sau produse nedigerate, prezente in fecale.
-in cazul in care in scaunul spontan se evidentiaza helmitii sau elemente suspecte, acestea se recolteaza cu o pensa si se introduce intr-un borcan curat.
- probele recoltate trebuie trimise la laborator in maxim 4 ore, iar daca acest lucru nu este posibil, probele se vor pastra la +4ºC pana a doua zi.
- pentru un diagnostic corect si semnificativ recoltarea trebuie facuta din trei probe de scaun la interval de 3-4 zile si sa nu urmeze un tratament antiparazitar.
• Pentru coprocultura
- recoltarea se face in coprorecoltoare de plastic cu lingurita si mediu de transport.
- in recoltor se pun una-doua lingurite cu materii fecale si este strict necesar ca ele sa fie introduse in mediul de transport.
- se pastreaza la temperatura camerei; se insamanteaza in maxim 12 h, pentru Shigella imediat dupa recoltare
• Recoltarea secretiilor faringiene
- se realizeaza dimineata, pe nemancate, inainte de efectuarea toaletei orale.
- cu ajutorul unui tampon cu vata steril se incepe stergerea usoara, fara a produce hemoragii, a amigdalei, mergand apoi pe bolta palatina ajungand la cealalta amigdala, dupa care se sterge partea posterioara a faringelui. Nu se ating peretii laterali ai faringelui.
- pentru frotiu se recomanda recoltarea din zona amigdalelor, acolo unde se observa ulceratii si chiar prezenta puroiului
- se utilizeaza numai tampoane cu mediu de transport
- se pastreaza la temperatura camerei, se insamanteaza in maxim 12 h
• Recoltarea secretiilor nazale
- se realizeaza din fiecare nara,
- inainte de recoltare bolnavul isi face toaleta nazala ( isi sufla nasul) si nu se sterge.
- se introduce tamponul in cavitatea nazala, cu atentie, si se roteste tamponul pentru a stimula mucoasa nazala.
- dupa recoltare se extrage tamponul, iar bolnavul isi face din nou toaleta.
- recoltarea trebuie sa se faca din fiecare nara cu un alt tampon.
- se pastreaza la temperatura camerei, se insamanteaza in maxim 12 h
• Recoltarea din secretii uretrale
- Recoltarea se face dimineata, inainte de mictiune, cu un tampon steril.
- Se preleveaza pe tampon scurgerea uretrala spontana sau provocata prin presiunea blinda asupra meatului uretral. Daca nu apare scurgere spontana se prinde penisul intre degetul medius si inelar iar cu degetul mare si indexul se deschide meatul urinar. In afara excitatiei sexuale si a mictiunii recente, meatul urinar nu trebuie sa contina fluid vizibil. Daca in afara acestor doua situatii meatul urinar prezinta urme de fluid, acesta se preleveaza pe tampon - In cazul in care la nivelul meatului urinar se observa fluide, dupa stergerea cu tamponul se amprenteaza meatul urinar pe doua lame de microscop sterse in prealabil cu alcool si uscate. Pe aceste lame se noteaza cu marker-ul numele pacientului sau codul de bare. Lamele se lasa sa se usuce in loc ferit de curenti de aer. Se  trimite la laborator impreuna cu tamponul de exsudat
- Daca nu se poate face prelevarea la nivelul meatului se recolteaza intrauretral cu tamponul. Tamponul se introduce in uretra blind, cu miscari fine de rotatie pina la o adincime de c.c.a 2 cm. La retragere se se imprima tamponului tot miscari de rotatie. Acest prim tampon se descarca pe 2 lame de microscop pe care se noteaza cu marker-ul numele pacientului sau se lipeste codul de proba. Se repeta recoltarea cu un al 2-lea tampon, de data aceasta patrunzindu-se intrauretral cu c.c.a 1 cm mai adinc decit cu primul tampon.
- Se pastreaza la temperatura camerei, se insamanteaza in maxim 12 h; se recolteaza pentru frotiu cu un alt tampon steril, care apoi este descarcat pe 1 sau 2 lame care nu se fixeaza
- Recoltare Mycoplasma /Ureaplasma din uretra se recolteaza cu un tampon de exsudat si se descarca imediat in recipientul cu reactiv R1(din kit), recipient procurat din laborator
- Recoltarea se face ca pentru recoltare din uretra incercindu-se sa se recolteze cat mai multe celule ;
- Reactivul 1 nerecoltat din trusa de Mycoplasma/Ureaplasma se pastreaza la frigider (2-8°C) ; dupa recoltare reactivul se tine tot la frigider (2-8 °C) maxim 24 ore .
- Pe recipiente se lipeste eticheta cu cod de bare identic cu cel de pe cerere sau alte recipiente recoltate pacientului in acelasi timp.
- Recoltare Chlamydia trachomatis din uretra:se utilizeaza un kit special de recoltare (1 tampoan subtire cu tija metalica si un tub cu mediu de transport), cu tamponul se incearca sa se ia cat mai multe celule (nu secretie purulenta sau mucoasa)
- Dupa recoltare, virful tamponului se introduce in recipientul special dedicat , avind grija ca partea cu produs (dopul de vata) sa fie imersat in mediul de transport; tija tamponului se rupe pentru a putea inchide cu capac recipientul
• Recoltarea din secretii purulente
- NU se recomanda recoltarea de exsudate din colectii purulente deschise dupa efectuarea tratamentelor locale cu antiseptice sau antibiotice. In cazul in care acest lucru nu se poate intimpla, se anunta laboratorul.
- pentru cultura se utilizeaza numai tampoane cu mediu de transport
- se pastreaza la temperatura camerei, se insamanteaza in maxim 12 h;
• Recoltarea secretiilor conjunctivale
- Inainte de recoltare se pregateste numarul corespunzator de tuburi de exsudat cu mediu de transport.
- Pe tuburile de exsudat se specifica de la care ochi este recoltat si se noteaza cu marker-ul (Ex. Drept, Sting)
- Pacientul este asezat pe scaun cu capul asezat pe spate
- Cu policele sting fixind o comprese sterila, se coboara pleoapa inferioara pentru a evidentia fundul de sac conjunctival; cu indexul fixind o comprese sterila se ridica pleoapa superioara pentru a se evita contaminarea cu germeni de pe geana superioara prin clipire
- Se recolteaza cu tampon umezit in ser fiziologic steril, din fundul de sac conjunctival, cu o miscare usoara dar ferma dinspre unghiul interior spre unghiul exterior al ochiului. Imediat tamponul cu exsudat se introduce in tubul cu mediu
- Se pastreaza la temperatura camerei, se insamanteaza in maxim 12 h;
• Recoltarea din secretii otice
- Pacientul este asezat pe scaun cu urechea indreptata spre sursa de lumina. Se introduce blind un tampon in ductul auditiv extern si se roteste usor. Daca secretia este abundenta se recomanda stergerea secretiei scurse in pavilion cu un tampon steril si apoi recoltarea secretiei.
- Pe tuburile de exsudat se specifica din care ureche este recoltat si se noteaza cu marker-ul (Ex. Drept, Sting )
- Se pastreaza la temperatura camerei, se insamanteaza in maxim 12 h;
• Recoltare sputa:
- Recoltarea este recomandata sa se faca dimineata intr-un recipient steril cu gatul larg.
- Pacientul tuseste si expectoreaza direct in recipientul steril, fara a-si aduna saliva
- Cantitatea trebuie sa fie de aproximativ 2-4 ml.
• Spermocultura :
- In vederea recoltarii este nevoie de un recipient steril (urocultor cu gura larga)
- se pastreaza la temperatura camerei; se insamanteaza in maxim 6 h
• Pentru spermograma:
- Pacientul va avea o perioada de abstinenta sexuala de 3-5 zile; nu va folosi prezervativ pentru recoltare; cu o 1 saptamâna înainte de recoltare va opri medicatia in curs, daca acest lucru este posibil
- Proba trebuie transportata la laborator în max. 30 de minute de la emisie, la o temperatura de 37°C. Pentru a pastra temperatura de ~ 37°C recipientul se aduce in contact cu pielea pe tot parcursul transportului !
- Pentru o apreciere corecta a fertilitatii se recomanda 3 sau mai multe determinari în decurs de 2-3 luni
- Rezultate concludente se obtin în urma recoltarii prin masturbare. Daca din motive psihologice sau religioase aceasta metoda nu este accesibila se accepta si proba recoltata prin metoda contactului sexual întrerupt.
 

3. Pentru cultura din secretie vaginala/col, examen citologic cervico-vaginal:
- Cultura din secretie vaginala se recolteaza numai in recipiente cu mediu Amies/Stuart; probele recoltate se pastreaza la temperatura camerei (20 °C) maxim 12 ore ; se evita recoltarea la pacientele care au avut contact sexual in ultimele 24 ore, flora vaginala putand fi contaminata cu flora partenerului ;
Pe linga cultura se recolteaza si 1-2 frotiuri care se lasa sa se usuce pentru a evita lipirea lamelor intre ele ; frotiurile de secretie vaginala NU se fixeaza cu fixator pentru Babes, acesta modifica afinitatea tinctoriala a germenilor ; se incearca intinderea frotiului pe aprox 2/3 din lama intr-un strat cat mai subtire dar cu miscari blande pentru a nu leza celulele. OBS.: in cazul unui frotiu corect executat se poate vedea Trichomonas chiar pe frotiu colorat.
- Lamele se eticheteaza numai la capatul matuit pe cat posibil pe aceeasi parte cu frotiul.
- Specii bacteriene aerobe identificate in cultura din secretia vaginala :
Streptococcus agalactiae (grupB) si alti streptococi hemolitici, Staphylococcus aureus, Gardnerella vaginalis, Neiserria sp.(si aspect specific pe frotiu), Gram negativi (Escherichia colli, Klebsiella sp.), Enterococcus, Listeria.
- Speciile anaerobe (Mobiluncus sp., Bacteroides) necesita insamantarea pe mediu special in maxim 10 minute de la recoltare, fapt pentru care se recomanda recoltarea in cadrul Centrului Medical Matei Basarab atunci cand exista suspiciunea unor infectii cu astfel de germeni.
- Recoltare Mycoplasma /Ureaplasma din col - se incearca sa se recolteze cat mai multe celule (nu secretie purulenta sau mucoasa) ; se evita recoltarea la pacientele care si-au aplicat tratament local cu ovule, acestea influenteaza trusa.
Reactivul 1 nerecoltat din trusa de Mycoplasma/Ureaplasma se pastreaza la frigider (2-8 °C) ; dupa recoltare reactivul se tine tot la frigider (2-8 °C) maxim 48 ore .
- Recoltare Chlamydia trachomatis din col: se utilizeaza un kit special de recoltare (2 tampoane si un recipient), cu un tampon se recolteaza surplusul de secretie si se arunca, iar cu cel de-al 2-lea se incearca sa se ia cat mai multe celule (nu secretie purulenta sau mucoasa) si se rupe tamponul in recipientul din kit ; se evita recoltarea la pacientele care si-au aplicat tratament local cu ovule, acestea influenteaza trusa.
- Dupa recoltare recipientul se poate pastra la frigider (2-8 °C) maxim7 zile.
- Recoltare Babes in mediu lichid:
- Dupa vizualizarea colului uterin se insera partea centrala a periutei în canalul endocervical astfel încât marginile mai scurte sa vina în contact cu exocervixul. De obicei nu se recomanda stergerea colului uterin înainte de recoltare, dar la nevoie se poate tampona usor cu un tifon. Cu partea centrala fixa, se roteste complet periuta în sensul acelor de ceasornic de cinci ori .
- Pentru recoltarea în mediu lichid sunt recomandate dispozitivele din plastic. Dupa recoltare, partea detasabila a instrumentului este introdusa în flaconul cu mediu lichid, fara a se efectua alte manevre asupra suprafetei care contine materialul celular.
- Proba astfel recoltata trebuie imediat fixata pentru a se evita deteriorarea probei. În acest scop se detaseaza capatul periutei care contine materialul recoltat si se introduce în recipientul cu mediu lichid.
-Se acopera flaconul cu capacul, se însurubeaza pentru a nu se varsa lichidul, se eticheteaza imediat (sau înaintea recoltarii probei) si se transporta in camera de colorare împreuna cu fisa de însotire a pacientei (formular“Examen citologic cervico-vaginal”) în vederea prelucrarii.
- Este foarte important ca, pe lânga corectitudinea recoltarii, proba sa fie însotita si de datele clinice cât mai complete ale pacientei: vârsta, data ultimei menstruatii, data recoltarii, antecedente medicale, tratamente, metode de contraceptie etc
 

4. Pentru testare HPV (ADN/ARNm):
- Se evita recoltarea probei in perioada menstruala, cu 48 de ore inainte de recoltare se evita :contactul sexual, folosirea tampoanelor intravaginale, spalaturi vaginale, administrarea diverselor geluri, creme si tratamente intravaginal, administrarea de contraceptive orale
-Pentru recoltare :
- se pune in evidenta colul uterin, se indeparteaza cu delicatete mucusul de la nivelul colului uterin cu ajutorul unui tampon steril(daca se considera necesar)
- se recolteaza celule cervicale in recipient cu mediu lichid (Cell Collection Media) cu ajutorul periutei cervicale
Dupa recoltare se introduce periuta in recipientul mai sus mentionat si se descarca energic prin invirtire de 8-10 ori, apoi, periuta se arunca si se inchide recipientul ermetic
Cind la aceeasi pacienta se recolteaza secretie vaginala, PAP’s si testare HPV, ordinea recoltarii este urmatoarea : secretie vaginala, PAP’s, testare HPV (ADN/ARN)
- Stocarea probei in cazul testarii:
- HPV ARNm : se pastreaza la 2-8 ºC timp de o saptamina sau 1 luna la - 20 ºC
- HPV ADN : se pastreaza la temperatura camerei timp de 21 zile sau la 2-8 ºC timp de 12 saptamini
 

5. Pentru cariotipul din lichid amniotic:
- Proba trebuie sa ajunga in laborator pana la maxim orele 14°° - 15°°, deoarece sunt necesare procesari ulterioare ale probei ce trebuie realizate imediat dupa momentul receptionarii, pentru ca ea sa poata fi cultivata in vitro
-Proba trebuie recoltata in conditii de maxima sterilitate, numai in seringi B/BRAUN sau BECTON DICKINSON
- Se anunta laboratorul in momentul in care proba este deja recoltata pentru a se putea face pregatirile necesare
- Proba nu se depoziteaza la rece
- Cantitatea de lichid amniotic necesara cultivarii in vitro este de 20 ml(in seringa, cu acul atasat)
- Proba trebuie sa fie insotita de datele pacientei, varsta sarcinii, motivul pentru care este solicitata analiza si numele medicului care solicita analiza; se transporta la 20- 25°C
- Proba trebuie procesata in aceeasi zi cu recoltarea
 

6. Pentru FISH-UL din lichid amniotic:
- Cantitatea de lichid amniotic pentru FISH-ul interfazic este de 10 ml (in seringa, cu acul atasat)
- Proba trebuie sa fie insotita de datele pacientei, varsta sarcinii, motivul pentru care este solicitata analiza si numele medicului care solicita analiza proba se poate depozita 24 de ore la 4°C, insa, daca este posibil, se recomanda ca ea sa ajunga in laborator in ziua recoltarii
- Transport: 20-25° C, in recipiente special destinate transportului probelor biologice (genti termoizolante)
 

7. Pentru cariotipul din singe :
- In momentul recoltarii pacientul nu trebuie sa fie sub tratament cu antibiotic. In caz contrar se renunta la recoltare si se face o alta programare, dupa 2 saptamani de la terminarea tratamentului cu antibiotic (antibioticele influenteaza tehnica de lucru si obtinerea rezultatului). De aceea, medicul trebuie sa se asigure de un eventual tratament cu antibiotice pe care-l urmeaza pacientul inainte de a face programarea pentru recoltare recoltarea se face prin punctie venoasa in eprubete de 6 ml cu dop verde (cu heparina sodica)
- Alternativ se poate recolta in seringa de 5 ml B/BRAUN sau BECTON DICKINSON. In seringa se trag 0,1 ml Heparina Sodica 5000 U/ml peste care se aspira sangele pana la 5 ml.
- Imediat dupa recoltare, sangele din seringa se omogenizeaza cu heparina printr-o miscare de inversare a seringii de cateva ori (pentru evitarea coagularii)
- Se anunta laboratorul in momentul in care proba este deja recoltata pentru a se putea face pregatirile necesare. Se recomanda ca proba sa ajunga in laborator pana la ora 15°°, deoarece sunt necesare diferite proceduri premergatoare cultivarii in vitro imediat dupa
momentul receptionarii probei in laborator
- In cazul solicitarilor din provincie (distante mari) pentru cariotip-sange, proba se poate stoca la 4°C pentru maxim 24 de ore, cu recomandarea ca proba sa ajunga in laborator in cel mai scurt timp posibil (este influentata calitatea rezultatului) proba trebuie sa fie insotita de datele pacientului, motivul pentru care este solicitata analiza si numele medicului care solicita analiza
Pe recipiente se lipeste eticheta cu cod de bare identic cu cel de pe cerere sau alte recipiente recoltate pacientului in acelasi timp!

Fisiere la download

protocoale de recoltare

sus